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胞內(nèi)RNA與蛋白質(zhì)結(jié)合情況的驗證: RIP

實驗意義

研究細胞內(nèi)RNA與蛋白質(zhì)的結(jié)合情況，有助于了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的動態(tài)過程，發(fā)現(xiàn)miRNA的調(diào)控靶點，可了解惡性腫瘤以及遺傳學(xué)疾病等整體水平的RNA變化以及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的變化，應(yīng)用于病理診斷及科學(xué)研究。

實驗原理及步驟

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RIP)的基本原理是使用目標蛋白的抗體捕獲內(nèi)源性的RNA-蛋白的復(fù)合物，然后通過免疫沉淀的方法把RNA-蛋白復(fù)合物一起分離下來，然后通過RT-PCR. RIP-Seq (高通量

測序)或RIP-Chip (microarray) 來鑒定結(jié)合的RNA序列。RIP流程如下圖

結(jié)果展示：

實驗周期及交付標準

1.實驗周期: 1-3個月

2.交付標準: RIP鑒定結(jié)果報告、分析報告、實驗報告(試劑、耗材、實驗步驟)、

原始數(shù)據(jù)等

需確認的信息

1.目的基因與蛋白信息。

2.是否提供抗體

3.樣本分組及分析要求

參考文獻

[1] Gagliardi M, Matarazzo M R. RIP: RNA Immunoprecipitation[J]. Methods in Molecular Biology, 2016, 1480:73.

[2] Meyer K，K?Ster T，Nolte C . et al. Adaptation of iCLIP to plants determines the binding landscape of the clock-regulated RNA-binding protein AtGRP7[J] Genome Biology, 2017, 18(1):204.

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