改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯(lián)合染色簡(jiǎn)稱(chēng) HE 染色，是病理學(xué)和組織學(xué)常用的一種染色方法。蘇木精為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的主要成分是DNA，在DNA 的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易不帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。

改良Lillie-Mayer 蘇木素染色液無(wú)毒，無(wú)氧化膜，細(xì)胞核染色質(zhì)著色深而細(xì)微，臨床上常替代Harris 蘇木素染色液。對(duì)細(xì)胞核染色很清晰，不著染胞質(zhì)和纖維成分，屬進(jìn)行性

染色，故染色后可以不用鹽酸乙醇分化，染色時(shí)間約 5～8min，如果是充分氧化后可染色 3～

5min。常用于糖原等特染、酶組化和免疫組化等染色后復(fù)染細(xì)胞核作對(duì)照染色，尤其適用  于經(jīng)過(guò)特殊染色后不能經(jīng)酸處理時(shí)對(duì)細(xì)胞核的復(fù)染。在特殊染色中，常不天青石藍(lán)B液聯(lián)合染色，使細(xì)胞核染色后不被后續(xù)的酸性染料所褪色。

染色原理：

1、細(xì)胞核染色的原理：

蘇木素為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA

雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA 雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易不帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。

2、細(xì)胞漿染色的原理：

伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下可使細(xì)胞漿著色。細(xì)胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細(xì)胞漿的染色不染液的 pH 值密切相關(guān)。當(dāng)染色液 pH 值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(diǎn)(4.7～5.0)以下時(shí)，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細(xì)胞漿帶正電荷，就可   被帶負(fù)電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，不胞漿蛋白質(zhì)帶正

電荷的陽(yáng)離子結(jié)合，使細(xì)胞漿著色，呈現(xiàn)紅色。

3、分化作用：

染色后，用某些特定的溶液將組織過(guò)多結(jié)合的染色劑脫去，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為分化作用，所 用的溶液稱(chēng)為分化液。在HE 染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu)，使組織不色素分離而退色。大多數(shù)組織經(jīng)蘇木素染色后，必須用 1%鹽酸乙醇分化，使細(xì)胞核過(guò)多結(jié)合的蘇木素染料和細(xì)胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進(jìn)行伊

紅染色，才能保證細(xì)胞核不細(xì)胞漿染色的分明。

4、返藍(lán)作用：

分化之后，蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下處于藍(lán)色

離子狀態(tài)，呈藍(lán)色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，立即用水除去組織切 片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為返藍(lán)作用或藍(lán)化作用。另外用自來(lái)水浸洗也可使細(xì)胞核返藍(lán)，但所需時(shí)間較長(zhǎng)。

產(chǎn)品組成：改良 Lillie-Mayer  蘇木素染色液 100ml 500ml RT 避 光

自備材料：

1、酸性乙醇分化液

2、藍(lán)化液，如稀氨水、碳酸鋰溶液等

3、系列乙醇

4、伊紅染色液

5、4%多聚甲醛

操作步驟(僅供參考)：

(一)石蠟切片染色

1、切片脫蠟至水

①□二甲苯作用 2 次，每次 5～10min。

②□(可選)無(wú)水乙醇作用 2 次，每次 3～5min。

③□95%的乙醇 3～5min

④□90%的乙醇           3～5min

⑤□80%的乙醇           3～5min

⑥□自來(lái)水或蒸餾水沖洗   1～3min

2、染色

①改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液染色     5～8min

②自來(lái)水或蒸餾水沖洗                     5～10s

③(可選)鹽酸乙醇分化                      2～5s

④自來(lái)水沖洗                             20～30s

⑤(可選)藍(lán)化液返藍(lán)                        20～40s

⑥自來(lái)水沖洗                              30～60s 3～5min

⑦伊紅染色液染色                          3～5min

⑧□自來(lái)水沖洗                             1～5s

2、脫水、透明、封固

①□80%乙醇       10～20s

②□90%乙醇              10～20s

③□95%乙醇作用 2 次，每次 1～2min。

④□無(wú)水乙醇作用 2 次，每次 2～3min。

⑤□二甲苯透明 3 次，每次 2～3min。

⑥□中性樹(shù)脂封片。          

染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維等呈深淺不一的紅色；角蛋白、紅細(xì)

胞等呈明亮的橙紅色。

(二)冰凍切片染色

1、乙謎醚-乙醇混合固定液        5～10s

2、自來(lái)水沖洗                2～5s

3、改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液滴染 1～2min(可加熱至 50℃)。

4、自來(lái)水沖洗            2～5s

5、(可選)鹽酸乙醇分化      2～5s

6、自來(lái)水沖洗             2～5s

7、(可選)藍(lán)化液返藍(lán)         2～5s

8、自來(lái)水沖洗               5～10s

9、伊紅染色液染色           2～5s

10、自來(lái)水沖洗              1～2s

11、80%的乙醇              1～2s

12 、95%的乙醇             1～2s

13、無(wú)水乙醇                2～5s

14、苯酚二甲苯(1:3)                 2～5s

15、二甲苯透明 3 次，每次 2～5s。

16、中性樹(shù)脂封片

染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、纖維呈紅色。

(三)細(xì)胞染色

1、4%多聚甲醛固定 10～20min。

2、自來(lái)水沖洗 2 次，每次 2min。

3、蒸餾水沖洗 2 次，每次 2min。