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CCK-8試劑盒的技術(shù)流程和使用的注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù):879 更新時(shí)間:2022-10-28
  CCK-8試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)水平。用純化的待測(cè)物質(zhì)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入待測(cè)物質(zhì),再與HRP標(biāo)記的待測(cè)物質(zhì)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物質(zhì)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)濃度。
  CCK-8試劑盒的技術(shù)流程:
  1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次。
  2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。
  3、加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體0.05ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。
  4、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
  5、終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
  6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
  CCK-8試劑盒使用注意事項(xiàng):
 ?。?)所有試劑應(yīng)按照適合溫度儲(chǔ)存。請(qǐng)勿反復(fù)凍融。
  (2)使用后均需要對(duì)操作區(qū)進(jìn)行消毒,消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均需使用商品化的無(wú)酶耗材。
  CCK-8試劑盒樣本注意事項(xiàng):
 ?。?)細(xì)胞在含/不含血清的環(huán)境中均可直接使用試劑盒。
 ?。?)擴(kuò)增2kb以內(nèi)片段,細(xì)胞樣品濃度不超過(guò)1000個(gè)細(xì)胞。如若擴(kuò)增片段超過(guò)2kb,可適當(dāng)提高細(xì)胞濃度。
 ?。?)不同組織使用不同的眼科剪和眼科鑷進(jìn)行處理,防止交叉污染導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏差。
  CCK-8試劑盒使用過(guò)程中注意事項(xiàng):
 ?。?)PCR過(guò)程中推薦使用陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。
  (2)整個(gè)過(guò)程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中,防止形成環(huán)境污染。
 ?。?)PCR產(chǎn)物3’末端含有A,可直接進(jìn)行TA克隆。

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號(hào)

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