執(zhí)照.jpg)
酶聯免疫電擴散測定技術
酶聯免疫電擴散是免疫電擴散（Immunoelectrodiffusion,簡稱IED）與免疫酶技術相結合的樣新技術，其原理在于通過免疫電擴散，抗原與該抗原相應的IgG快速形成免疫復合物，接著用酶標記的抗IgG免疫球蛋白與免疫復合物孵育結合，然后用底物顯色。
酶聯免疫電擴散技術增加了免疫電擴散的靈敏度，對分析復雜的抗原反應和不同類型的免疫球蛋白，都有作用。
電泳儀（包括電泳槽）；醋酸纖維薄膜（2.5cm×17cm）；微升吸管；大號培養(yǎng)皿等實驗用玻璃器皿。
可溶性抗原溶液；該抗原相應的兔抗血清；HRP標記的抗兔IgG抗體，其中特異性抗體蛋白的濃度為1.25mg/ml;0.1mol/LpH8.2巴比妥緩沖液；0.2%Haemosol溶液；0.1mol/L Ph7.6Tris緩沖液；0.01mol/LpH7.2 PBS;洗滌液(85gNaCI,500ml巴比妥緩沖液，蒸餾水加至1000ml);底物與供氫體溶液（H2O2與DAB－4HC1）。
⑴在醋酸纖維薄膜上用軟鉛筆劃好點樣線，每條點樣線距離膜邊3cm，對距11cm,在每條點樣線中間用軟鉛筆劃好點樣點。
⑵在0.1mol/LpH8.2巴比妥緩沖液中浸濕，滴干水，但要保持濕潤。
⑶用微升吸管點樣，一點加抗原3ul(或1ul),另一點加兔抗待測抗原的血清15ul(或5ul),每份點樣的抗原濃度為0.001－50ug.
⑷電泳條件。用濕濾紙搭橋，電泳緩沖液為0.1mol/L pH8.2巴比妥緩沖液，電流強度為1mA/cm,電泳時間為2h,抗原端接負極。
⑸電泳完畢，將薄膜浸入洗滌液30min，去多余的血清蛋白與游離抗原。
⑹將薄膜浸入0.01mol/L pH 7.2PBS中，振蕩洗滌30min,取出薄膜，滴干余水。
⑺將酶標記抗體以1：50稀釋。
⑻用稀釋的酶標記抗體在室溫孵育2h.
⑼在0.2%Haemosol溶液中振蕩洗滌15min.
⑽在Tris緩沖液中振蕩浸洗30min.
⑾在底物溶液中浸1min后，觀察顯色結果。
實驗代做服務：
|
