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無血清培養(yǎng)基的研發(fā)
研制針對特殊細胞系或原代培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基主要有兩種方法.種方法是找到一個相關細胞類型的培養(yǎng)基已知配方,加入或不加10%~20%的透析血清,在減少血清的同時,逐一或成組的改變培養(yǎng)基成分直到培養(yǎng)基達到你所特殊需要的理想條件.這種方法初由Ham及其同事[Ham,1984]采用,通常能提供理想培養(yǎng)條件.如果發(fā)現一組成分對血清的減少起到補充的作用,那就通過單種成分的逐步逐一刪除將這一活性成分從中篩選出來然后尋找其理想濃度[Ham,1984].當然,這是一項耗時而繁雜的工作,包括繪制細胞生長的生長曲線,每個階段做克隆生長分析,找到一種適合新細胞類型的新培養(yǎng)基至少要三年時間.
由于種方法耗費時間長,使人們想到了第二種方法:對現在培養(yǎng)基,如RP-MI1640或DMEM與Ham’s F12的聯(lián)合培養(yǎng)基加以補充,而且將加入成分的種類限制在一個較小的范圍內,僅包括硒,轉鐵蛋白,白蛋白,胰島素,氫化可di松,雌激素,三磺甲狀腺氨酸,乙醇胺,磷酸乙醇胺,生長因子(EGF,FGF,PDGF,內皮生長添加物等),前列腺素和其他有特殊功能的物質.通常對多數細胞而言,硒,轉鐵蛋白,胰島素都很重要,但對其他成分的需求則差別較大.
適應無血清培養(yǎng)基
無血清的培養(yǎng)基的制備
